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簡(jiǎn)單分享液相C18柱的出峰順序

  • 發(fā)表時(shí)間2024-06-13
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液相色譜(HPLC)中的C18柱是一種常見(jiàn)的反相色譜柱,C18代表十八烷基鍵合相(octadecylsilane)。在反相色譜中,固定相是疏水性的,而流動(dòng)相通常是極性的。樣品中的化合物根據(jù)其疏水性不同,會(huì)在固定相和流動(dòng)相之間分配,從而得到分離。  
一般來(lái)說(shuō),使用C18柱時(shí),出峰順序主要受待測(cè)化合物的疏水性影響。具體而言:  
極性較大的化合物:這些化合物與極性的流動(dòng)相有較強(qiáng)的相互作用,因此在柱上滯留時(shí)間較短,會(huì)首先被洗脫下來(lái)。  
極性較小的化合物(疏水性較強(qiáng)的化合物):這些化合物與疏水性的C18固定相有較強(qiáng)的相互作用,因此在柱上滯留時(shí)間較長(zhǎng),會(huì)較晚被洗脫下來(lái)。  
影響出峰順序的因素  
除了化合物本身的極性之外,以下因素也會(huì)影響出峰順序:  
流動(dòng)相的組成:流動(dòng)相的極性對(duì)出峰順序有重要影響。增加流動(dòng)相中有機(jī)溶劑(如乙腈或甲醇)的比例,會(huì)降低流動(dòng)相的極性,使得疏水性化合物更早出峰。  
流動(dòng)相的pH:對(duì)于帶電的化合物,流動(dòng)相的pH會(huì)影響其離子化狀態(tài),從而影響其保留時(shí)間。  
溫度:溫度變化會(huì)影響化合物在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù),從而改變出峰順序。  
流速:流動(dòng)相的流速也會(huì)影響分離效果和出峰順序。  
示例  
假設(shè)我們有一組化合物,其中包括苯酚、甲苯和對(duì)二甲苯,用C18柱進(jìn)行分離。在標(biāo)準(zhǔn)條件下(適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相和流速),極性從大到小的化合物出峰順序通常如下:  
苯酚(極性最大)  
甲苯(中等極性)  
對(duì)二甲苯(極性最?。?nbsp; 
當(dāng)然,這只是一個(gè)簡(jiǎn)單的示例。實(shí)際應(yīng)用中,具體的出峰順序可能因流動(dòng)相的選擇、梯度洗脫的設(shè)計(jì)以及其他分離條件的不同而有所變化。因此,在進(jìn)行具體實(shí)驗(yàn)之前,需要根據(jù)目標(biāo)化合物的特性和實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化和驗(yàn)證。

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